欧蒙微孔板ELISA
实验原理
- 将纯化的、已鉴定生化特性的抗原包被在固相的聚苯乙烯微孔板上。
- 若标本为阳性,已稀释的血清中的特异性抗体将与包被在固相上的抗原结合。
第二步,过氧化物酶标记的抗人抗体与已结合的抗体反应。
第三步,结合的标记抗体与色原底物溶液作用后而呈现颜色。颜色的深浅与血清标本中抗体的浓度成正比。
单特异性ELISA试剂盒(包被有单特异性抗原)可提供对一种抗体的定量体外检测。“抗体谱ELISA”试剂盒可在一条微孔板上对多种不同抗体分别进行半定量体外检测。
“混合ELISA”试剂盒的固相包被有混合抗原,可半定量检测多种抗体,而其单特异性需进一步检测。
可靠而经济的定标/结果分析
- 定量ELISA, 使用如下三个标准品:
- 校准血清1:检测范围上限
- 校准血清2:正常范围上限(cut-off值)
- 校准血清3:阴性
- 定标仅需三个反应孔。不需做空白对照或双孔检测。
- 半定量ELISA仅需一个校准血清。
- 标准品采用相对单位(RU/ml),若有国际性参考血清则用国际单位(IU/ml)。
- 每次实验可选择使试剂盒中的阳性或阴性质控血清。依批号不同,为每个标准品和质控血清提供了相应的靶值参考范围。
- 所有定标方法均可用普通ELISA软件实现。
操作简单,快速经济
- 微孔板由可拆分的反应孔组成(抗体谱ELISA试剂盒除外),每个微孔外壁有相应抗原的缩写标志以防混淆。
- 试剂可直接使用(洗液除外),分别有不同的颜色标志,易于辨认。
- 深红色:校准血清1
- 红色:校准血清2
- 淡红色:校准血清3
- 深蓝色:阳性对照血清
- 绿色:阴性对照血清
- 淡蓝色:样本缓冲液
- 橙色:POD标记的抗人IgA
- 绿色:POD标记的抗人IgG
- 红色:POD标记的抗人IgM
- 青绿色: POD标记的抗人IgGM
- 黄色: POD标记的抗人IgAGM
- 血清学检测病原体IgM抗体的ELISA试剂盒中,标本缓冲液含有欧蒙IgG/RF吸附剂。
- 由于所有ELISA试验的温育时间(30分钟; 30分钟; 15分钟)是一致的,多个实验可在同一块微孔板中进行温育。温育在室温进行。
- 与所有的商业化洗板和读板系统相匹配。
检测低亲和力抗体
- 抗体亲和力测定可作为诊断近期感染的另一血清学指标。
- 感染之后首先出现的免疫反应是形成低亲和力抗体。随后产生病原特异性IgG抗体,亲和力也逐渐增强。在血清中未检测到高亲和力IgG抗体之前,仍被认为处于感染初期。
- 为检测低亲和力抗体,一份患者血清用微孔板ELISA作双孔平行测定:一个按照常规方法操作,另一个在温育患者血清和温育过氧化物酶标记的抗人IgG抗体两步之间加入尿素处理,以使低亲和力抗体与抗原分离。
- 若经尿素处理之后检测到的ELISA吸光度值明显降低,即提示存在低亲和力抗体。可用尿素温育与无尿素温育的检测值之比作为相对亲和力指数(RAI)。
- 血清1:100稀释;酶结合物为POD标记的抗人IgG抗体。
- 3个标准品,定量(IgG)。
- 亲和力检测有如下试剂盒:刚地弓形虫、CMV、风疹病毒、VZV及EBV-CA。
检测脑脊液中的抗体
- 适应证:大脑局部感染。
- 脑脊液1:2稀释。血清1:404稀释。酶结合物为POD标记的抗人IgG或IgM抗体。
- 易于操作:试剂可直接使用。
- 4个标准品,定量。一致的温育条件和时间(室温;60分钟/60分钟/15分钟):检测脑脊液的欧蒙ELISA试剂均可组合在一起,在一块微孔板中同时操作。
- 在检测脑脊液中的病原特异性抗体浓度的同时,可用同一块微孔板检测血清中相应抗体的浓度。两者的比值即病原特异性CSQ。
- 如果病原特异性CSQ值明显高于总IgG抗体的CSQ或临界的CSQ值,即提示存在鞘内合成病原特异性抗体。病原特异性CSQ值与总IgG抗体的CSQ值之比,即相对CSQ(CSQrel.,同义词:抗体特异性指数,ASI)。
- 结果解释(根据Reiber教授推荐):
- CSQrel. < 1.3: 正常值
- CSQrel. 1.3 - 1.5: 临界值
- CSQrel. > 1.5: 提示中枢神经系统有病原特异性抗体产生。
- 为使CSQrel. 的计算自动化,欧蒙公司免费提供一份专用的Excel计算表格。
- 高度灵敏特异,重复性好。在线性范围内可计算血清和脑脊液中的抗体浓度。
- 可提供如下试剂盒检测CSF中的特异性抗体:布氏疏螺旋体、刚地弓形虫、HSV-1、HSV-2、HSV-1/2(混合)、CMV、风疹病毒、麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒、VZV、森林脑炎病毒及EBV-CA。
- 所有CSF检测系统均可适用于血清学检测。
- 完全适用于自动化温育。






