实验原理
- 细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质均可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。
- 如标本为阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与包被在固相上的抗原结合。
- 第二步，已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体结合，然后在荧光显微镜下观察结果。
阳性标本经系列稀释后可测出其滴度。最适稀释因子为3.162（10的平方根），这样，每隔一步就出现一个10的整数倍数（1:10、1:32、1:100、1:320、1:1000、 1:3200, 1:10000等）。
间接免疫荧光法检测自身抗体和病原体抗体的标准技术
- 特异性高：阳性与阴性标本的荧光强度差别明显。每种已结合的抗体在相应抗原的位置产生典型的荧光模型。
- 基质中抗原谱完整，可检测多种抗体，并且检出率高。
- 可在一种生物基质上同时检测多种抗不同生化特性抗原的抗体
- 当酶免试剂所需要的抗原难以制备或无法获得时，可选择间接免疫荧光法。
欧蒙的技术革新实现了间接免疫荧光法的标准化和现代化
- 生物薄片技术和生物薄片马赛克。
- 活化技术：将培养的细胞或组织切片包被在经物理或化学方法活化的盖玻片上。冰冻组织切片以共价键结合在盖玻片表面，它们之间的结合力提高了数百倍，从而能够防止基质的脱落。
- 生物薄片技术：使用自动化机械将包被有生物基质的盖玻片切割成毫米大小的小片（生物薄片）。每个组织切片可制得数十张或更多性质均一的优质基质片；若是培养的细胞，则甚至可制得数千片。
- 生物薄片马赛克™：将包被有不同基质的生物薄片固定在一个反应区中，可同时检测多种抗不同组织或病原体的抗体。将在不同基质上检测到的结果相互补充，能够较容易地得到一份详细的抗体谱报告。
- 滴定平板™技术 : 将标本或试剂滴加到加样板反应区上，然后把生物薄片载片盖在加样板的凹槽里，所有生物薄片均与液滴接触，反应同时开始。由于液体被限制在封闭的空间里，从而不再需要传统的“湿盒”。
化学方法活化的组化用载玻片
- 冰冻组织切片以共价键结合至盖玻片表面。
- 组织器官特异性自身抗体的检测需要用到各种组织器官的冰冻组织切片。然而，以往在水性介质中的温育，会使切片的组织形态受损，部分组织有时可能脱落，导致实验结果难以解释。
- 我们首次在组织学中应用基质活化技术。首先，将具有活性的醛基包被到盖玻片表面。第二步，包被组织切片（Stöcker, W：化学方法活化的盖玻片，欧洲专利号0117262；美国专利号4,647,543）。组织的游离氨基，尤其是胶原中所含的羟基赖氨酸能够与载体材料通过共价键结合。这样，冰冻组织切片与盖玻片之间的结合力提高了数百倍，从而能够防止基质在温育过程中脱落。
不仅如此，这种活化技术有时还有利于更好地保持组织的结构完整，对于那些粘附力较差的组织尤其如此。因此，实验结果更加可信。
检测低亲和力抗体
- 抗体亲和力测定可作为诊断近期感染的另一重要的血清学指标。
- 感染之后首先出现的免疫反应是形成低亲和力抗体。随后产生病原特异性IgG抗体，亲和力也逐渐增强。在血清中未检测到高亲和力IgG抗体之前，仍被认为处于感染初期。
- 为检测患者血清中的低亲和力抗体，两个免疫荧光实验平行进行：一个按照常规方法操作，另一个在温育患者血清和温育FITC标记的抗人IgG抗体两步之间加入尿素处理，以使低亲和力抗体与抗原分离。
- 如经尿素处理后荧光强度显著降低（两倍或更多），即提示存在低亲和力抗体。
- 可提供如下病原体抗体亲和力测定试剂盒：刚地弓形虫、风疹病毒、西尼罗河病毒、EBV-EA和EBV-CA。
EUROPLUS™系统：传统免疫荧光基质和单特异性检测的结合
- EUROPLUS™系统: 包被组织切片/细胞基质（左）和抗原点的生物薄片。
- 在EUROPLUS™免疫荧光实验中，同时采用组织切片/细胞基质和单特异性反应的抗原点。
- 因此，在IFT筛查实验中，可在一次实验的同一反应区区分或确认待检抗体。在一些情况下，抗原点还有助拓展抗体谱，提供更广的筛查范围。
- 包被有纯化抗原或重组抗原的生物薄片即可作为单特异检测的基质。
- 显微镜下阳性结果为在黑色背景下抗原点呈现圆形绿色荧光。
- 在一些EUROPLUS™检测系统中，几种不同的抗原包以抗原点排列形式被在同一块生物薄片中。在这种情况下，可使用单个生物薄片进行多种单特异分析。
- 可提供多种不同的生物薄片组合，用于各种诊断检测。
